Описание
Наборы клонирования pENTR ™ / D-TOPO® используют высокоэффективную стратегию клонирования 5 минут («клонирование TOPO®») для направленного клонирования продукта ПЦР тупого конца в вектор для входа в систему Gateway® или MultiSite Gateway ®. Продукт ПЦР с тупым концом направлен с направлением в сторону более 90% эффективности без применения лигазы, пост-ПЦР-процедур или рестрикционных ферментов.
Комплект поставляется со всем необходимым для клонирования и выбора вашего усиленного гена PCR:
• Gateway® System Ready - быстро перемещает клонированные гены между несколькими векторными системами.
• Быстро и легко перейти от PCR к Gateway® Entry clone всего за 3 шага и как немного, как ~ 5 минут вовремя
• Эффективно-Достичь более 90% клонов с правильной вставкой в правильном направлении.
• Проверенная надежность. Более десяти лет
Комплекты для клонирования pENTR ™ / D-TOPO® Обзор
ВЕКТОР
|
вектор pENTR ™ / D-TOPO®
|
Направленный вектор клонирования для входа в систему шлюза
|
МЕТОД КОДИРОВАНИЯ
|
Направленное клонирование TOPO®
|
Топоизомераза I на основе 5-минутного направленного лигирования продуктов ПЦР с субстратной коррекцией с полимеразной амплификацией к вектору
|
КОМПЕТЕНТНЫЕ КЛЕТКИ
|
Два варианта
|
Выбирайте из комплектов с высокой эффективностью или быстро растущими компетентными ячейками
|
Простой доступ к системе Gateway®
Для доступа к системе Gateway® просто PCR усиливает ваш ген, представляющий интерес, и добавляет продукт прямо к предоставленному топоизомеразе, заряженному вектору pENTR ™ / D-TOPO®, инкубирует 5 минут и преобразует предоставленные компетентные E. coli . Полученные attL-содержащие квоты Gateway® Entry готовы для эффективной рекомбинации с вашим выбором векторов Gateway® Destination.
Оптимизированный вектор pENTR ™ / D-TOPO® Vector
Вектор pENTR ™ / D-TOPO® (фиг. 1) включает сайты секвенирования праймеров M13 и T7 и сайты рекомбинации attL, фланкирующие сайт для введения продукта PCR. Это позволяет легко проверять последовательности и рекомбинировать клоны в ваш выбор attR, содержащий векторы назначения Gateway®. Ген для резистентности к канамицину и источник pUC используются для селекции и высокоскоростного распространения в E.coli .
Упрощенное наклонное клонирование
С технологией клонирования Nirectional TOPO® нет необходимости в очистке ПЦР, подготовке вектора или других временных манипуляциях по обработке ДНК. Просто добавьте свою реакцию ПЦР прямо к предоставленному вектору, покрытому топоизомеразой, инкубируйте 5 минут, трансформируйте и получите до 90% направленных внутрь клонов. Четыре основных свеса на векторных парах с четырьмя базовыми последовательностями, сконструированными в прямом праймере, используемом в вашей реакции ПЦР, для обеспечения направленности реакции лигирования топоизомеразы (рисунок 2).
Технология клонирования технологии Gateway® для рекомбинации
Технология клонирования методом Gateway® обходит ограничения ограниченного ограничением клонирования, позволяя вам получить доступ к практически любой системе экспрессии в течение простого часа, 99% -эффективной и обратимой реакции рекомбинации Gateway®. Способность перемещать одну и ту же последовательность ДНК между различными векторами без использования рестрикционных ферментов, лигазы, этапов субклонирования, скрининга бесчисленных колоний или повторного секвенирования поможет сэкономить вам время, деньги и усилия.
Ведущие технологии клонирования
Когда дело доходит до клонирования, технология клонирования TOPO® и технология клонирования рекомбинации Gateway® были надежным партнером для тысяч ученых уже более десяти лет. Быстрое, простое в использовании и эффективное клонирование TOPO® и рекомбинация Gateway® позволяют быстро клонировать и последующей передачи генов между широким спектром векторов экспрессии Gateway®.
Варианты комплектации
Набор для клонирования pENTR ™ / D-TOPO® можно приобрести либо с помощью компетентных клеток TOP10 для стандартного клонирования, либо для компетентных клеток Mach1 ™ -T1R для быстрого роста.
Только для исследования. Не предназначен для использования в терапевтических или диагностических целях для животных или человека.